TEV蛋白酶

产品描述

TEV蛋白酶（TEV Protease）是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶，具有很强的位点特异性，严格识别七肽序列EXXYXQ↓（G/S），切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。普遍应用的七肽序列为：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。可把His、MBP或GST等标签设计在融合蛋白的N端，并在标签与目的蛋白之间设计加入上述七肽序列，在His、MBP或GST标签被酶切后，在目的蛋白的N端仅有一个额外的Gly/Ser氨基酸残基，从而最大限度地减少了对目的蛋白结构和功能的影响。TEV蛋白酶在pH 7.0，30℃时可达到最佳活性，且在pH 6.0-8.5和温度4-30℃的广泛范围内皆有活性，使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。

德泰生物TEV蛋白酶为使用E.coli表达经亲和纯化的重组蛋白酶，带有多聚His标签，便于融合蛋白切割后利用亲和层析去除蛋白酶。

产品应用

融合蛋白标签剪切去除。

活性定义

在 1×TEV Protease Buffer（50 mM Tris，pH 8.0，0.1 mM EDTA，1 mM DTT）中，30℃ 反应 1 h，剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。

保存条件

-80℃条件下可保存2年；-20°C条件下可保存6个月；避免反复冻融。

使用说明

1. 酶切条件

推荐4℃酶切过夜，用户可以根据自己的目的蛋白进行摸索最佳酶切条件。

2. 酶切条件的优化

由于不同目的蛋白具有不同的特性，所以在实际使用时，建议对酶和目的蛋白的比例进行适当优化。

a. 将反应混合物放置于30°C反应1小时。如果目的蛋白在30°C不稳定，可以考虑4°C反应过夜（16小时左右）。

b. 取20 μL样品进行SDS-PAGE电泳分析，确定反应所需的合适酶量和合适的反应时间。

Lane1：纯化的融合蛋白X

Lane2：纯化的TEV蛋白酶

Lane3-6：TEV蛋白酶的用量从左至右依次为0.25U、0.5U、1U、2U，30ºC酶切反应1 h，取样进行SDS-PAGE电泳

Lane7：Lane6酶切条件放大，酶切后样品与Ni-NTA Resin结合后的流穿

TEV酶切及镍柱回收参考图

注意事项

1. TEV蛋白酶的最佳酶切温度是30ºC，在实际操作过程中，为尽量保留目的蛋白的结构和生物活性，可以在4ºC用TEV 蛋白酶酶切过夜。TEV 蛋白酶在pH 6.0-9.0范围内具有活性，而当pH小于或等于5时，会失去酶活性。

2. TEV蛋白酶还有一个突出的优点是在400 mM咪唑中仍有较高活力，因此对于很多用镍柱纯化的His标签目的蛋白，可直接将TEV蛋白酶加入含高浓度咪唑的刚刚纯化的目的蛋白溶液中，在4ºC边透析去除咪唑边进行酶切。当然也可以在透析后再用TEV 蛋白酶进行酶切以去除His标签。经过酶切的目的蛋白，溶液中带有His标签的TEV 蛋白酶以及切除下来的His标签，都可以通过与镍柱结合而去除。

3. TEV蛋白酶的酶活性不会被常见的丝氨酸蛋白酶抑制剂（serine proteinase inhibitor），如PMSF、AEBSF、Bestatin、Pepstatin、E-64、TLCK和EDTA所抑制。但靶向半胱氨酸（Cysteine）残基的蛋白酶抑制剂如NEM或IAA等，可以显著抑制TEV蛋白酶的酶活力，因为天然的TEV蛋白酶含有其维持酶活力所必需的Cys151。

4. 本产品仅适用于科研用途。