重组蛋白表达纯化

德泰生物致力于为客户提供高纯度、低成本的活性重组蛋白，包括各类受体、细胞因子、生长因子、转录因子、激素、酶、毒性蛋白、病毒抗原等，满足客户下游科研实验研究的需求。德泰拥有先进的蛋白表达技术及丰富的蛋白表达经验，完成了多种正常条件下不表达、难表达、表达量低的蛋白的制备。

迄今为止，德泰共交付10000+组重组蛋白（各类野生型蛋白及突变型蛋白）。交付的蛋白被用于抗体制备、ELISA、IHC、药物研究、动物实验、晶体结构分析、体外酶活测定、细胞实验等下游实验。

为什么选择我们？

高成功率：自建实验室，自主研发多项实验技术，实验成功率大于98%，交付的近千组蛋白已成功应用于抗原生产，抗体药研发，诊断试剂，疫苗研究等领域
高纯度蛋白：四大蛋白纯化方法，结合AKTA蛋白纯化系统，可定制高纯度蛋白（>95%）,应用于酶制剂，晶体结构分析，生物活性实验等
一站式服务：只需提供基因序列，德泰完成载体构建，蛋白表达，蛋白纯化（内毒素去除/RNA酶去除），抗体制备，相互作用分析等一站式服务。德泰蛋白表达技术平台

重组蛋白表达系统

重组蛋白有很多的应用，包括抗原制备，蛋白相互作用，酶学分析，及药物靶点研究。选择合适的蛋白表达系统，对下游蛋白的应用有重要影响。蛋白功能，产率，成本是优先考虑的几个因素。德泰为您提供多个重组蛋白表达系统，满足您的不同需求。

原核表达系统
（E.coli）

提供多种重组质粒和转化宿主菌株，优化温度、IPTG浓度、培养时间等表达条件，根据最高产量参数组合进行放大。

适用于表达原核蛋白，简单的真核蛋白以及同位素标记蛋白等。

哺乳动物表达系统
（Mammalian）

自建细胞房，自主研发高表达载体，十几年细胞培养，几十种细胞转染经验，快速交付毫克或工业级蛋白，不成功不收费。

适用表达分泌蛋白，跨膜蛋白，酶类，离子通道等，蛋白结构接近天然状态，活性更高。

酵母表达系统
（Pichia）

制定灵活的表达载体构建方案，优化筛选分泌型表达载体（pPIC9、pHIL-S1、pPICZa）与宿主菌株，包括Mut⁺、Mut^s。

适用于表达真核蛋白、分泌蛋白、某些胞质定位且无糖基化修饰蛋白等。

昆虫表达系统
（Insect）

根据蛋白性质选择胞内表达或分泌表达，筛选高效融合载体与表达细胞，确定最优表达量的表达条件。

适用于表达高等真核生物蛋白、分泌蛋白、多元蛋白复合物等。

重组表达案例

案例一

案例概况：表达的目的蛋白分子量在10kD左右，利用大肠杆菌表达系统进行表达。实验的难点为蛋白需要无标签表达纯化，纯化难度较大；同时由于下游应用的特殊性，需要去除蛋白质中的DNA。

Fig1 :目的蛋白纯化图

Fig2：DNA检测结果

德泰通过查阅大量文献及多次纯化条件摸索，最终成功纯化得到目的蛋白,纯度>90%。经琼脂糖凝胶电泳检测，无DNA残留。

案例二

案例概况：该案例中目的蛋白为聚体蛋白（蛋白的活性结构以四聚体形式存在），客户采用哺乳动物瞬转的方法表达该蛋白，在表达时遇到了转染效率低、蛋白表达水平低，细胞培养上清中无法检测到四聚体等问题。在实验失败后，客户找到德泰生物。
公司接手该项目之后，对基因序列、表达载体与宿主细胞进行优化，提高蛋白表达水平。同时对转染方法进行优化，优化后转染效率明显提高。

转染方法优化前与优化后转染效率对比

Fig3：转染方法优化前（左）与优化后（右）转染效率对比

采用亲和纯化的方法进行目的蛋白的纯化，层析过柱之后，在还原和非还原状态下分别对上清洗脱组分进行电泳，证实细胞培养上清中确实存在该聚体蛋白。最终通过亲和纯化，成功纯化得到该聚体蛋白。

还原状态与非还原状态上清洗脱组分电泳图

Fig4：还原状态（lane 3）与非还原状态（lane 4）上清洗脱组分电泳图

附录：重组蛋白表达系统对比表

特点		大肠杆菌	酵母	昆虫细胞	哺乳动物细胞
生产周期		4~6周	~9周	~9周	7~9周
价格		+	++	+++	+++
表达水平		高（>50%）	低-高（>10%）	低-高（>20%）	低-高（>30%）
蛋白质折叠		部分折叠	不完全正确折叠	正确折叠	正确折叠
规模化生产		+++	++	++	++
翻译后修饰	磷酸化	无	有	有	有
	乙酰化	无	有	有	有
	酰胺化	无	无	无	有
	γ-羧基	无	有	有	有
	糖基化	无	有	有	有